1.基本情况

本技术基于重组酶聚合酶扩增（RPA）与CRISPR/Cas12b系统相结合，建立了一种高灵敏度、高特异性的布鲁氏菌核酸快速检测方法。该方法可在等温条件下完成扩增与检测，无需复杂仪器，30分钟内即可完成检测，适用于现场快速筛查与实验室精准诊断。

2.技术特点

（1）精准高效

高灵敏度：检测灵敏度可达1pg/μL（约10拷贝/测试），与传统的qPCR方法相当，能够极早期地发现感染。

高特异性：基于CRISPR/Cas12b的精准识别，与牛结核、牛病毒性腹泻病毒、绵羊痘病毒等相近病原体无交叉反应，结果准确可靠。

高符合率：与金标准qPCR方法对临床样本的检测符合率达到100%，阳性检出率一致。

（2）快速便捷

反应快速：整个检测过程仅需30分钟，远快于需要数小时的传统PCR方法。

一步法操作：创新性地将RPA扩增与CRISPR检测整合在单一反应体系中，无需开盖，避免了气溶胶污染，简化了操作步骤。

闭管检测：减少了样本间交叉污染的风险，提升检测安全性。

（3）简单稳定

等温检测：全过程在恒温（~37-42°C）下进行，无需复杂的升降温仪器（如PCR仪），对设备和实验环境要求极低。

体系稳定：采用的Cas12b酶能耐受更宽的温度和pH范围，使试剂更易于储存和运输，性能更稳定。

（4）灵活直观

多平台输出：可根据应用场景选择配套的检测方式：

①荧光读数平台：适合需要定量或更高通量的场景，结果由设备客观判读。

②试纸条可视化平台：适合现场快速筛查，结果肉眼可见（T线/C线），无需任何仪器。

适用于复杂样本：配套的快速核酸提取方法可处理多种样本类型（如组织、血液等）。

3.应用范围

适用于多种场景：其特性使其非常适合基层兽医站、养殖场、口岸检疫、疾控中心的现场快速检测（POCT）和实验室精准诊断。技术可扩展性强：该技术平台已验证成功，可为其他病原体的快速检测开发提供技术模型和基础。

4.知识产权

成果由北京农学院单独持有。

5.所处阶段

目前处于小批量生产，并有原理样机。

6.合作需求

转让/许可/以该科技成果作为合作条件，与他人共同实施转化/以该科技成果作价投资，折算股份或者出自比例/其他协商确定的方式。

RPA-CRISPR一步法技术原理图

CRISPR多靶标微流控芯片设计示意图

仪器参数和芯片